Waad ku mahadsan tahay booqashada Nature.com.Nooca browserka aad isticmaalayso waxa uu leeyahay taageerada CSS oo xadidan.Waayo-aragnimada ugu fiican, waxaan kugula talineynaa inaad isticmaasho browser-ka la cusboonaysiiyay (ama aad damiso Habka Laqabsiga ee Internet Explorer).Dhanka kale, si loo xaqiijiyo taageerada joogtada ah, waxaan ka dhigi doonaa goobta iyada oo aan lahayn qaabab iyo JavaScript.
Xididdada hidda-wadaha ee daawaynta cystic fibrosis sambabada waa in lagu bar-tilmaameedsadaa marinnada hawo-mareenka, maadaama sambabada durugsani aanay lahayn wax saamayn ah oo daweyn ah.Wax ku oolnimada gudbinta fayrasku waxay si toos ah ula xiriirtaa wakhtiga deggenaanshaha sidaha.Si kastaba ha ahaatee, dareerayaasha dhalmada sida kuwa hidde-sideyaasha ayaa si dabiici ah ugu faafa alveoli inta lagu jiro neefsashada, iyo walxaha daweynta ee qaab kasta ayaa si degdeg ah looga saaraa gaadiidka mucociliary.Kordhinta wakhtiga deggenaanshaha sidayaal hidde-sideyaasha mareenka neef-mareenka waa muhiim laakiin way adagtahay in la gaaro.Qaybaha magnet-ka-isku-xidhan ee sidaha ah ee loo jiheeyo dusha sare ee mareenka neef-mareenka waxay hagaajin karaan beegsiga gobolka.Dhibaatooyinka ku jira sawirka in vivo, hab-dhaqanka qaybo yaryar oo birlabeed ah oo ku yaal dusha marinka hawo-mareenka ee joogitaanka goob birlabeed ah ayaa si liidata loo fahmay.Ujeedada daraasaddan waxay ahayd in la isticmaalo sawir-qaadista synchrotron si loo arko in vivo dhaqdhaqaaqa taxane ah oo qaybo magnet ah oo ku jira hawo-mareenka jiirka la suuxiyay si loo barto dhaqdhaqaaqa iyo qaababka habdhaqanka qaybaha hal-abuurka ah iyo kuwa bulk ee vivo.Waxaan sidoo kale qiimeynay in gaarsiinta walxaha magnetic lentiviral ee joogitaanka goobta magnetic ay kordhin doonto waxtarka gudbinta hawo mareenka jiirka.Sawirka raajada Synchrotron wuxuu muujinayaa hab-dhaqanka qaybaha birlabeedka ee ku jira meelaha magnetic-ka ee taagan iyo kuwa dhaqaaqa ee vitro iyo in vivo.Qaybaha si fudud looguma jiidi karo dusha sare ee hawo-mareenada nool iyadoo la isticmaalayo magnets, laakiin inta lagu jiro gaadiidka, kaydku waxay ku urursan yihiin goobta muuqaalka, halkaasoo magnetic field ugu xoogan yahay.Waxtarka beddelka ayaa sidoo kale kor u kacay lix laab markii qaybaha magnetic lentiviral la keenay iyada oo ay jirto goob magnet ah.Isku soo wada duuboo, natiijooyinkani waxay soo jeedinayaan in qaybaha magnetic lentiviral iyo meelaha magnetic ay noqon karaan habab qiimo leh si loo hagaajiyo bartilmaameedka hidda-socodka iyo heerarka gudbinta marinnada hawo-mareenka ee vivo.
Cystic fibrosis (CF) waxaa sababa kala duwanaanshiyaha hal hidde-side loo yaqaan CF transmembrane conductance regulator (CFTR).Borotiinka CFTR waa kanaal ion ah oo ku jira unugyo badan oo epithelial ah oo jirka oo dhan ah, oo ay ku jiraan marinnada hawada, oo ah goob weyn oo ka mid ah cudurrada faafa ee cystic fibrosis.Cilladaha CFTR waxay u horseedaan gaadiidka biyaha aan caadiga ahayn, fuuq-baxa dusha marin-haweedka, iyo hoos u dhaca lakabka dheecaanka hawo-mareenka (ASL).Waxa kale oo ay wax u dhimaysaa awoodda nidaamka gaadiidka mucociliary (MCT) si uu uga nadiifiyo hawo-mareenada qaybaha neefsashada iyo cudur-sidaha.Hadafkayagu waa inaan horumarino daawaynta hidda-wadaha lentiviral (LV) si loo bixiyo nuqulka saxda ah ee hidda-wadaha CFTR oo aan u wanaajino ASL, MCT, iyo caafimaadka sambabada, iyo inaan sii wadno horumarinta tignoolajiyada cusub ee cabbiri kara cabbirradan gudaha vivo1.
VV vectors waa mid ka mid ah musharaxiinta hormuudka u ah daaweynta hidda-wadaha cystic fibrosis, badiyaa sababtoo ah waxay si joogto ah u dhexgelin karaan hidda-wadaha daweynta unugyada asalka hawada marin-haweedka (unugyada stem marin-haweedka).Tani waa muhiim sababtoo ah waxay dib u soo celin karaan fuuq-celinta caadiga ah iyo nadiifinta xab-xabka iyagoo u kala saaraya unugyada dusha hawo-mareenka ee saxan ee hiddo-wadaha ee la xidhiidha cystic fibrosis, taasoo keentay faa'iidooyin nololeed oo dhan.Xididdada LV waa in lagu jiheeyaa marinnada hawo-mareenka, maadaama ay tani tahay meesha ka-qaybgalka sambabada ee CF ay ka bilaabato.Bixinta faleebo qoto dheer oo sambabada ayaa laga yaabaa inay keento beddelka alveolar, laakiin tani wax saameyn ah kuma lahan daweynta cystic fibrosis.Si kastaba ha ahaatee, dareerayaasha sida hidde-sideyaasha si dabiici ah waxay u guuraan alveoli marka la nuugo ka dib dhalmada3,4 iyo walxaha daweynta ayaa si degdeg ah ugu erya godka afka ee MCTs.Wax ku oolnimada gudbinta LV waxay si toos ah ula xiriirtaa dhererka wakhtiga uu vector-ku ku sii dhow yahay unugyada bartilmaameedka ah si loogu oggolaado qaadashada gacanta - "waqtiga degenaanshaha" 5 kaas oo si sahlan loo soo gaabiyo hawada caadiga ah ee gobolka iyo sidoo kale isku-dubarid qaadashada xabka iyo qaybaha MCT.Cudurka cystic fibrosis, awoodda lagu kordhinayo waqtiga LV ee hawo-mareenada waa muhiim si loo gaaro heerar sare oo ku-beddelid aaggan, laakiin ilaa hadda waa caqabad.
Si looga gudbo caqabadan, waxaanu soo jeedinaynaa in qaybaha magnetic LV (MPs) ay ku caawin karaan laba siyaabood oo is dhammaystir ah.Marka hore, waxaa lagu hagi karaa magnet si ay u hagaajiyaan bartilmaameedka iyo caawinta qaybaha hidde-sideyaasha si ay ugu jiraan aagga saxda ah ee marin-haweedka;iyo ASL) waxay u guuraan lakabka unugga 6. Xildhibaanadu waxa si weyn loogu isticmaalaa sida baabuurta la beegsado daroogada marka ay ku xidhaan unugyada difaaca jirka, daawooyinka kiimoterabiga, ama molecules kale oo yaryar oo ku dheggan xuubka unugyada ama ku xidha soo-dhoweeyaha unuggooda oo ku urura goobaha burooyinka joogitaanka koronto taagan.Goobaha magnetic ee daaweynta kansarka 7. Hababka kale ee "hyperthermic" waxaa loogu talagalay in lagu dilo unugyada burooyinka iyadoo la kululeynayo xildhibaanada marka ay la kulmaan goobaha birlabeedka.Mabda'a wareejinta magnetic, kaas oo goobta magnetic loo isticmaalo wakiilka wareejinta si kor loogu qaado wareejinta DNA ee unugyada, waxaa badanaa loo isticmaalaa in vitro iyada oo la adeegsanayo noocyo kala duwan oo ah unugyada hidde-sideyaasha aan fayraska iyo fayraska ahayn ee ay adagtahay in la beddelo khadadka gacanta. ..Waxtarka LV magnetotransfection oo leh gaarsiinta LV MP in vitro galay khadka gacanta ee epithelium boronkiitada bini'aadamka ee joogitaanka garoonka magnetic static ayaa la aasaasay, kordhinta waxtarka gudbinta by 186 jeer marka la barbar dhigo vector LV oo keliya.LV MT ayaa sidoo kale lagu dabaqay qaabka in vitro ee cystic fibrosis, halkaasoo gudbinta magnetic ay kordhisay gudbinta LV ee dhaqamada isdhexgalka dareeraha hawada iyada oo loo eegayo 20 marka ay jirto joogitaanka cystic fibrosis sputum10.Si kastaba ha noqotee, in vivo xubinta taranka magnetotransfection ayaa heshay dareen yar waxaana lagu qiimeeyay kaliya dhowr daraasadood oo xayawaan ah11,12,13,14,15, gaar ahaan sambabada16,17.Si kastaba ha ahaatee, suurtogalnimada wareejinta magnetic ee daaweynta sambabada ee cystic fibrosis waa caddahay.Tan iyo al.(2020) ayaa sheegay in "daraasad ansax ah oo ku saabsan bixinta sambabada wax ku ool ah ee nanoparticles magnetic waxay u xaari doontaa dariiqa mustaqbalka ee CFTR ee hababka neefsashada si loo wanaajiyo natiijooyinka caafimaad ee bukaanada qaba cystic fibrosis"6.
Habdhaqanka qaybo yaryar oo birlabeed ah oo ku yaal dusha sare ee mareenka neefsashada marka ay joogaan goob magnet ah oo la dabaqay way adag tahay in la arko oo la barto, sidaas darteed si liidata loo fahmo.Daraasado kale, waxaanu samaynay habka Faafinta Synchrotron ee ku salaysan isbarbardhigga raajada sawirka (PB-PCXI) ee sawirka aan fiicneyn iyo qiyaasidda daqiiqadaha vivo isbeddelka ASL18 qoto dheer iyo habdhaqanka MCT19,20 si toos ah loo cabbiro fuuqbaxa kanaalka gaaska. waxaana loo adeegsadaa tilmaame hore waxtarka daaweynta.Intaa waxaa dheer, habkayaga dhibcaha MCT waxay isticmaashaa qaybaha dhexroorka 10-35 µm oo ka kooban alumina ama muraayadda index refractive sare sida calaamadaha MCT ee la arki karo PB-PCXI21.Labada habba waxay ku habboon yihiin sawiridda noocyo kala duwan oo walxaha qayb ah, oo ay ku jiraan MPs.
Xallinta meel sare iyo wakhtiga ku meel gaadhka ah awgeed, qiimaynteena PB-PCXI ee ku salaysan ASL iyo MCT ayaa si fiican ugu haboon in la barto dhaq-dhaqaaqa iyo qaababka habdhaqanka qaybaha hal iyo bulk ee vivo si ay nooga caawiyaan fahamka iyo hagaajinta hababka gudbinta hidda-wadaha MP.Habka aan halkan u isticmaalno waxay ku saleysan tahay daraasadaheena iyadoo la adeegsanayo SPring-8 BL20B2 beamline, kaas oo aan ku aragno dhaqdhaqaaqa dareeraha ka dib bixinta qiyaasta faleebo-mareenka sanka iyo sambabada hawada ee jiirarka si ay uga caawiso sharaxaadda qaababka muujinta hidda-socodka ee la arkay. in hiddesidahayaga.daraasaadka xoolaha oo leh qiyaas qaade ah 3.4 .
Ujeedada daraasaddan waxay ahayd in la isticmaalo PB-PCXI synchrotron si loo arko dhaqdhaqaaqa vivo ee taxane ah oo xildhibaanno ah oo ku jira hawo-mareenka jiirka nool.Daraasadaha sawir-qaadista ee PB-PCXI waxaa loogu talagalay in lagu tijaabiyo taxanaha MP, xoogga goobta magnetic, iyo goobta si loo go'aamiyo saameyntooda dhaqdhaqaaqa MP.Waxaan u qaadanay in goob birlabeed ah oo dibadda ah ay ka caawin doonto MF-ta la keenay inay sii joogto ama u guurto aagga bartilmaameedka.Daraasadahani waxay sidoo kale noo oggolaadeen inaan go'aaminno qaabeynta magnetka kuwaas oo kor u qaadaya cadadka walxaha ku haray hawo-mareenka ka dib marka la dhigo.Taxane labaad oo daraasado ah, waxaanu ujeednay inaanu isticmaalno qaabayntan ugu fican si aanu u muujino qaabka wax-is-beddelka ee ka dhashay keenista vivo ee LV-MP-yada marin-haweedka jiirka, iyada oo loo malaynayo in gaarsiinta LV-MP-yada macnaha guud ee beegsiga marin-haweedka ay keeni doonto. kor u kaca waxtarka gudbinta LV..
Dhammaan daraasaadka xayawaanka waxaa loo qabtay si waafaqsan borotokoolka ay ansixisay Jaamacadda Adelaide (M-2019-060 iyo M-2020-022) iyo SPring-8 Synchrotron Animal Animal Ethics Committee.Tijaabooyinka waxaa loo sameeyay si waafaqsan talooyinka ARRIVE.
Dhammaan sawirada raajada ayaa laga qaaday BL20XU beamline ee SPring-8 synchrotron ee Japan iyadoo la adeegsanayo qalab la mid ah kii hore loo sharraxay21,22.Si kooban, sanduuqa tijaabada ah wuxuu ku yaal meel 245 m u jirta giraanta kaydinta synchrotron.Masaafada muunad-ilaa-fiiriye ee 0.6 m ayaa loo isticmaalaa daraasadaha sawir-qaadista iyo 0.3 m daraasadaha sawir-qaadista ee vivo si loo abuuro saamaynta isbarbardhigga wajiga.Laydh monochromatic ah oo tamar ah 25 keV ayaa la isticmaalay.Sawirada waxaa lagu helay tarjumaha X-ray (SPring-8 BM3) ee xallinta sare leh oo lagu daray qalabka sCMOS.Transducer-ku wuxuu u beddelaa raajada iftiinka muuqda isagoo isticmaalaya 10 µm dhumucdiisuna waxay tahay scintillator (Gd3Al2Ga3O12), kaas oo markaa lagu hago dareenka sCMOS iyadoo la adeegsanayo ujeeddada mikroskoob ×10 (NA 0.3).Baaraha sCMOS wuxuu ahaa Orca-Flash4.0 (Hamamatsu Photonics, Japan) oo leh cabbir isku dubaridan 2048 × 2048 pixels iyo cabbir pixel ceeriin ah 6.5 × 6.5 µm.Goobtani waxay ku siinaysaa cabbirka isotropic ee wax ku ool ah oo ah 0.51 µm iyo goob muuqaal ah oo ku dhow 1.1 mm × 1.1 mm.Muddada soo-gaadhista ee 100 ms ayaa la doortay si loo kordhiyo saamiga signal-ilaa-sanqa ee qaybaha magnetic gudaha iyo dibadda hawo mareenada iyada oo la yareynayo dhaqdhaqaaqa dhaqdhaqaaqa ee ay keento neefsashadu.Daraasadaha vivo, shutter-ka degdega ah ee raajada ayaa lagu dhejiyay dariiqa raajada si loo xaddido qiyaasta shucaaca iyadoo la xirayo iftiinka raajada ee u dhexeeya soo-gaadhista.
Warbaahinta LV looma isticmaalin SPring-8 PB-PCXI daraasaadka sawirka sababtoo ah qolka sawirka BL20XU maahan Heerka Biosafety Heerka 2 shahaado.Taa baddalkeeda, waxaan dooranay tiro xildhibaano ah oo si fiican loo yaqaan oo ka yimid laba shirkadood oo ganacsi oo daboolaya cabbirro kala duwan, qalabyo, uruurinta birta, iyo codsiyada, - marka hore si aan u fahamno sida meelaha magnetic u saameeyaan dhaqdhaqaaqa xildhibaanada ee muraayadaha muraayadaha, ka dibna gudaha hawo mareenada nool.dusha sare.Cabbirka MP waa kala duwan yahay 0.25 ilaa 18 µm waxaana laga sameeyay walxo kala duwan (fiiri Shaxda 1), laakiin halabuurka muunad kasta, oo ay ku jiraan cabbirka qaybaha birlabeedka ee MP, lama yaqaan.Iyada oo ku saleysan daraasadaheenna ballaaran ee MCT 19, 20, 21, 23, 24, waxaan fileynaa in xildhibaanada ilaa 5 µm lagu arki karo dusha marinka hawo-mareenka, tusaale ahaan, iyadoo laga jarayo xirmooyin isku xigta si loo arko muuqaalka dhaqdhaqaaqa MP.Hal MP oo ah 0.25 µm ayaa ka yar xallinta aaladda sawirka, laakiin PB-PCXI ayaa la filayaa inay ogaato kala duwanaanshaha mugga iyo dhaqdhaqaaqa dareeraha dusha sare ee lagu shubo ka dib marka la dhigo.
Tusaalooyinka xildhibaan kasta oo miiska saaran.1 waxaa lagu diyaariyey 20 μl kaabadaha galaaska (Drummond Microcaps, PA, USA) oo leh dhexroor gudaha ah 0.63 mm.Qaybaha maqaarka ayaa laga heli karaa biyaha, halka walxaha CombiMag laga heli karo dareeraha gaarka ah ee soo saaraha.Tuubo kasta waxaa ka buuxa dareere (qiyaastii 11 µl) waxaana la dulsaaraa muunada qaadka (eeg sawirka 1).Koofiyadaha muraayadaha ayaa si siman loo dhigay marxaladda qolka sawirka, siday u kala horreeyaan, oo la dhigay cidhifyada dareeraha.Dhexroor 19 mm ah (dherer 28 mm) nikkel-shell magnet oo ka samaysan dhul naadir ah, neodymium, iron iyo boron (NdFeB) (N35, bisad. LM1652, Jaycar Electronics, Australia) oo leh dib u soo celin 1.17 T ayaa lagu dhejiyay miiska kala wareejinta kala duwan si aad u gaadho Meel fog ka beddel booskaaga marka wax lagu qabanayo.Sawirka raajada waxa uu bilaabmaa marka magnet-ku la dhigo ku dhawaad ​​30 mm ka sarraysa muunadda sawirraduna waxa lagu helay 4 fareem ilbiriqsikii.Inta lagu jiro sawir-qaadista, magnet-ka ayaa la keenay meel u dhow tuubada koodhka muraayadda ( fogaan ah 1 mm) ka dibna loo dhaqaaqay tuubada si loo qiimeeyo saameynta xoogga goobta iyo booska.
Habaynta sawirka in vitro oo ka kooban muunado MP oo ku jira xididada dhalada ah ee heerka turjumaada muunada xy.Jidka raajo raajo waxaa lagu calaamadeeyay xariiq dhibco cas.
Marka la dhiso muuqaalka in vitro ee xildhibaanada, qayb yar oo iyaga ka mid ah ayaa lagu tijaabiyay vivo dhedig nooca duurjoogta ah ee Wistar albino (~ 12 toddobaad jir ah, ~ 200 g).Medetomidine 0.24 mg/kg (Domitor®, Zenoaq, Japan), midazolam 3.2 mg/kg (Dormicum®, Astellas Pharma, Japan) iyo butorphanol 4 mg/kg (Vetorphale®, Meiji Seika).Jiirka ayaa lagu suuxiyay farmaajo (Japan) isku dar ah oo lagu duray intraperitoneal.Suuxinta ka dib, waxaa loo diyaariyey sawir-qaadista iyagoo ka saaraya dhogorta ku wareegsan hawo-mareenka, gelinta tuubada endotracheal (ET; 16 Ga xididka cannula, Terumo BCT), oo ay ku dhaqdhaqaajiyaan booska dhabarka ee saxan sawir-qaadis ah oo ka kooban boorso kulaylka. si loo ilaaliyo heerkulka jidhka.22. Saxanka sawir-qaadista ayaa markaa lagu dhejiyay marxaladda muunadda ee sanduuqa sawirka xagal yar si loo waafajiyo hawo-mareenka si toos ah sawirka raajada sida ku cad sawirka 2a.
(a) Habaynta sawirka vivo ee qaybta sawirka SPring-8, dariiqa shucaaca raajada oo lagu calaamadeeyay xariiq dhibco casaan ah.(b,c) Meelaynta magnet-ka tracheal waxaa lagu sameeyay meel fog iyadoo la isticmaalayo laba kamaradood oo IP ah oo orthogonally ku xiran.Dhinaca bidix ee sawirka shaashadda, waxaad arki kartaa wareegga siliga oo haya madaxa iyo cannula gaarsiinta oo lagu rakibay gudaha tuubada ET.
Nidaamka bamka saliingaha ee fog ee la kantaroolo (UMP2, Qalabka Saxda ah ee Adduunka, Sarasota, FL) iyadoo la isticmaalayo 100 µl saliingaha galaas ayaa lagu xidhay tuubada PE10 (0.61 mm OD, 0.28 mm ID) iyadoo la isticmaalayo irbad 30 Ga ah.Calaamadee tuubada si aad u hubiso in caaradu ay ku jirto booska saxda ah ee hawo mareenka marka la gelinayo tuubada endotracheal.Iyadoo la isticmaalayo micropump, tuubada saliingaha ayaa laga saaray waxaana caarada tuubada la dhex geliyay muunada MP si loo keeno.Tuubada gudbinta ee la raray ayaa markaa la geliyey tuubada endotracheal, iyada oo la gelinayo caarada qaybta ugu xoogga badan ee goobta magnetic-ka ee la filayo.Helitaanka sawirka waxaa la kontaroolay iyadoo la isticmaalayo qalabka neefta ee ku xiran sanduuqa waqtiga ku saleysan ee Arduino, iyo dhammaan calaamadaha (tusaale, heerkulka, neefsiga, furaha xirmada, iyo helitaanka sawirka) waxaa la duubay iyadoo la isticmaalayo Powerlab iyo LabChart (AD Instruments, Sydney, Australia) 22 Marka Sawirka Marka guryuhu aanu helin, laba kamaradood oo IP ah (Panasonic BB-SC382) ayaa la dhigay meel u dhow 90° midba midka kale waxaana loo adeegsaday in lagu xakameeyo booska magnetka marka loo eego trachea inta lagu jiro sawirka (Jaantuska 2b, c).Si loo yareeyo dhaqdhaqaaqa dhaqdhaqaaqa, hal sawir halkii neef ayaa la helay inta lagu guda jiro qulqulka socodka neef-mareenka.
Magnet-ku wuxuu ku xiran yahay marxaladda labaad, kaas oo laga yaabo inuu ku yaal meel fog oo ka baxsan jirka sawirka.Meelo kala duwan iyo qaabaynta magnetka ayaa la tijaabiyay, oo ay ku jiraan: la dhigay xagal qiyaastii 30° ka sarraysa hawo mareenka (habaynta ayaa lagu muujiyay jaantusyada 2a iyo 3a);hal magnet oo ka sarreeya xayawaanka iyo kan kale ee hoose, oo leh tiirarka loo dejiyey soo jiidashada (Jaantuska 3b)., Hal magnet oo ka sarreeya xayawaanka iyo mid ka hooseeya, oo leh tiirarka loo dejiyey inay diidaan (Jaantuska 3c), iyo hal magnet ka sarreeya oo siman trachea (Jaantus 3d).Ka dib markaad dejiso xayawaanka iyo magnetka oo aad ku shubto MP-ga tijaabada ah ee bamka saliingaha, keen qiyaas 50 µl ah oo ah 4 µl/sec marka la helo sawirada.Magnet-ka ayaa markaa dib loo dhaqaajiyaa oo la socda ama laga gudbayaa hawo mareenka iyada oo la sii wado helitaanka sawirada.
Qalabaynta Magnet ee in vivo imaging (a) Hal magnet oo ka sarraysa hawo-mareenka oo ah xagal qiyaas ahaan 30°, (b) laba birlab loo habeeyey soo jiidasho, (c) laba birlab loo habeeyey dib u celin, (d) Hal magnet oo sare ah oo siman hawo-mareenka.Kormeeruhu waxa uu hoos ka eegay afka ilaa sambabada isaga oo maraaya hawo-mareenka (trachea) kadibna raajada raajadu waxa ay martay dhinaca bidix ee jiirka oo ka baxay dhinaca midig.Magnet-ka waxa lagu dhaqaajiyaa dhererka marin-haweedka ama bidix iyo midig ka koraya hawo-mareenka hawada ee jihada laydhka raajada.
Waxaan sidoo kale raadinay inaan go'aamino muuqaalka iyo dabeecadda walxaha ku jira hawo-mareenada iyada oo aysan jirin isku-darka neefsiga iyo garaaca wadnaha.Sidaa darteed, dhammaadka xilliga sawir-qaadista, xayawaanku si bini-aadannimo leh ayaa loo nadiifiyey sababtoo ah xad-dhaafka pentobarbital (Somnopentyl, Pitman-Moore, Washington Crossing, USA; ~ 65 mg/kg ip).Xayawaanka qaar ayaa looga tagay goobta sawirka, ka dib markii ay joogsadeen neefta iyo garaaca wadnaha, habka sawir-qaadista ayaa lagu soo celiyay, iyadoo lagu daray qadar dheeraad ah oo MP ah haddii aan MP ka muuqan dusha hawada.
Sawirada soo baxay waxaa lagu saxay meel siman oo mugdi ah ka dibna waxaa la isugu keenay filim (20 fiim ilbiriqsikii; 15-25 x xawaaraha caadiga ah ee ku xiran heerka neefsiga) iyadoo la adeegsanayo qoraal gaar ah oo ku qoran MATLAB (R2020a, Mathworks).
Dhammaan daraasadaha ku saabsan gudbinta hidda-wadaha LV waxaa lagu qabtay Xarunta Cilmi-baarista Xayawaanka ee Jaamacadda Adelaide shaybaarka waxaana loogu talagalay in lagu isticmaalo natiijooyinka tijaabada SPring-8 si loo qiimeeyo in gaarsiinta LV-MP ee joogitaanka goobta magnetic ay kor u qaadi karto wareejinta hidda-wadaha ee vivo. .Si loo qiimeeyo saameynta MF iyo goobta magnetic, laba kooxood oo xayawaan ah ayaa la daaweeyay: hal koox ayaa lagu duray LV MF oo leh meelaynta magnetka, kooxda kalena waxaa lagu duray koox kantarool ah oo leh LV MF iyada oo aan magnet lahayn.
Xididdada hidda-wadaha LV ayaa la sameeyay iyadoo la adeegsanayo habab hore loo sharraxay 25, 26.Vector-ka LacZ wuxuu muujiyaa hidda-wadaha beta-galactosidase ee nukliyeerka ah ee deegaanka ee uu wado MPSV dhiirigeliyaha aasaasiga ah (LV-LacZ), kaas oo soo saara badeeco falcelin buluug ah oo ku jira unugyada la beddelay, oo laga arki karo hore iyo qaybaha unugyada sambabada.Titration waxaa lagu sameeyay dhaqamada unugyada iyadoo gacanta lagu tiriyay tirada unugyada LacZ-positive iyadoo la isticmaalayo hemocytometer si loo xisaabiyo titer gudaha TU/ml.Qaadayaasha waxaa lagu kaydiyaa -80°C, la dhalaalin ka hor intaan la isticmaalin, waxaana lagu xidhaa CombiMag iyadoo la isku darayo 1:1 oo lagu dhex beeray baraf ugu yaraan 30 daqiiqo ka hor dhalmada.
Jiirka caadiga ah ee Sprague Dawley (n = 3/koox, ~ 2-3 ip la suuxiyay oo isku jira 0.4mg/kg medetomidine) ) duritaanka iyo daacinta afka ee aan qaliinka ahayn oo leh 16 Ga oo xididka xididka ah.Si loo hubiyo in nudaha hawo-mareenka ee tracheal ay helaan gudbinta LV, waxaa lagu hagaajiyay iyada oo la adeegsanayo borotokoolka qallafsanaanta farsamada ee hore loo sharraxay kaas oo dusha sare ee marin-haweedka tracheal lagu xoqay dambiisha siligga (N-Circle, soosaar dhagax nitinol ah oo aan lahayn tip NTSE-022115 ) -UDH , Cook Medical, USA) 30 p28.Dabadeed, qiyaastii 10 daqiiqo ka dib qallafsanaanta golaha wasiirada biosafety, maamulka tracheal ee LV-MP ayaa la sameeyay.
Meesha birlabeedka ee tijaabadan lagu isticmaalay waxa loo habeeyey si la mid ah baadhitaanka raajada in vivo, iyada oo isla magnets-ka lagu hayo hawo-mareenka hawada oo leh xajin stent ah (Jaantuska 4).Mugga 50 µl (2 x 25 µl aliquots) ee LV-MP ayaa la geeyey hawo-mareenka hawada (n = 3 xayawaan) iyadoo la adeegsanayo pipette jel-caarad ah sida horay loo sharraxay.Kooxda xakamaynta (n = 3 xayawaan) waxay heleen isla LV-MP iyada oo aan la isticmaalin magnet.Ka dib marka la dhammeeyo faleebo, cannula ayaa laga soo saaraa tuubada endotracheal iyo xayawaanka waa la sii daayaa.Magnet-ku waxa uu sii jiraa 10 daqiiqo ka hor inta aan la saarin.Jiirka ayaa si hoose loogu qiyaasey meloxicam (1 ml/kg) (Ilium, Australia) oo ay ku xigto suuxinta ka-noqoshada iyadoo lagu duro intraperitoneal 1 mg/kg atipamazole hydrochloride (Antisedan, Zoetis, Australia).Jiirka waa la diiri jiray waana la arkay ilaa ay si buuxda uga soo kabato suuxdinta.
Qalabka gaarsiinta LV-MP oo ku jira golaha badbaadada noolaha.Waxa aad arki kartaa in cududda qafiifka ah ee Luer-lock ee tuubada ET ay ka soo baxayso afka, iyo caarada pipette jel ee lagu muujiyay shaxanka ayaa la dhex galinayaa tuubada ET ilaa qoto dheer ee la rabo hawo mareenka.
Hal usbuuc ka dib habraaca maamulka LV-MP, xoolaha ayaa si bini'aadantinimo loogu sadqeeyay neefsashada 100% CO2 iyo muujinta LacZ ayaa la qiimeeyay iyadoo la adeegsanayo daawaynta caadiga ah ee X-gal.Saddexda siddo ee carjawda ugu badan ayaa la saaray si loo hubiyo in waxyeello kasta oo makaanikada ah ama haynta dareeraha ay sabab u tahay meelaynta tuubada endotracheal aan lagu darin falanqaynta.Hawo-mareen kasta ayaa la jaray dherer ahaan si loo helo laba qaybood si loo falanqeeyo waxaana lagu riday koob ay ku jiraan caag silikoon ah (Sylgard, Dow Inc) iyadoo la adeegsanayo irbad Minutien (Qalabka Sayniska Fiican) si loo arko dusha iftiinka.Qaybinta iyo dabeecadda unugyada la beddelay waxaa lagu xaqiijiyay sawir-qaadista hore iyadoo la adeegsanayo microscope Nikon (SMZ1500) oo leh kamarad DigiLite iyo software TCapture (Tucsen Photonics, Shiinaha).Sawirada waxaa lagu helay weyneynta 20x (oo ay ku jiraan goobta ugu badan ee ballaca buuxa ee trachea), iyadoo dhererka trachea-ka oo dhan la soo bandhigay tallaabo tallaabo, taasoo bixisa isku-dhafka ku filan ee u dhexeeya sawir kasta si loogu oggolaado sawirada "in la tolo".Sawirada trachea kasta ayaa markaa la isku daray hal sawir oo isku dhafan iyadoo la isticmaalayo nooca Tifaftiraha Sawirka Isku-dhafka ah ee 2.0.3 (Microsoft Research) iyadoo la adeegsanayo algorithm dhaqdhaqaaqa qorshaynta. Aagga muujinta LacZ ee ku dhex jirta sawirada isku-dhafka tracheal ee xayawaan kasta ayaa lagu qiyaasey iyadoo la adeegsanayo qoraalka MATLAB ee otomaatiga ah (R2020a, MathWorks) sida hore loogu sharraxay28, iyadoo la adeegsanayo dejinta 0.35 <Hue <0.58, Saturation> 0.15, iyo Qiimaha <0.7. Aagga muujinta LacZ ee ku dhex jirta sawirada isku-dhafka tracheal ee xayawaan kasta ayaa lagu qiyaasey iyadoo la adeegsanayo qoraal toos ah MATLAB (R2020a, MathWorks) sidii hore loogu sharraxay28, iyadoo la adeegsanayo dejinta 0.35 <Hue <0.58, Saturation> 0.15, iyo Qiimaha <0.7. Площадь экспрессии LacZ в составных изображениях трахеи от каждого животного была количественно определена с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее28, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0 ,7. Aagga muujinta LacZ ee sawirada tracheal ee isku dhafan ee xayawaan kasta waxaa lagu qiyaasey iyadoo la adeegsanayo qoraal MATLAB otomaatig ah (R2020a, MathWorks) sida hore loogu sharraxay28 iyadoo la adeegsanayo goobaha 0.350.15 iyo qiimaha <0 .7.如前所述，使用自动MATLAB 脚本（R2020a，MathWorks）对来自每只动物的气管复合图像中的LacZ 表达区域进行量化，使用0.35 < 色调< 0.58、饱和度> 0.15 和值< 0.7 的设置。前所 述, 自动 自动 Matlab 脚本 (r20ona, xisaabta, 的 只 量化 的 气管 复合 图像 的 气管 复合 量化 的 气管气管 量化 使用 的.35 <色调 <0.38,> 0.1 <0.7 的…………………………………………………………. SIN Области экспрессии LacZ на составных изображениях трахеи каждого животного количественно определяли с использованием автоматизированного сценария MATLAB (R2020a, MathWorks), как описано ранее, с использованием настроек 0,35 <оттенок <0,58, насыщенность> 0,15 и значение <0,7 . Meelaha muujinta LacZ ee sawirada isku dhafan ee trachea ee xayawaan kasta ayaa lagu qiyaasey iyadoo la adeegsanayo qoraalka MATLAB ee iswada ah (R2020a, MathWorks) sida hore loogu sharraxay iyadoo la adeegsanayo goobaha 0.35 < hue <0.58, saturation> 0.15 iyo qiimaha <0.7.Iyada oo la raacayo jaangooyooyinka unugyada ee GIMP v2.10.24, maaskaro gacanta ayaa loo sameeyay sawir kasta oo isku dhafan si loo aqoonsado aagga nudaha loogana hortago wax kasta oo ogaanshaha beenta ah ee ka baxsan unugyada hawo-mareenka.Meelaha wasakhaysan ee dhammaan sawirada isku dhafan ee xayawaan kasta ayaa lagu soo koobay si ay u bixiyaan wadarta meesha wasakhaysan ee xayawaankaas.Aagga rinji ayaa markaa loo qaybiyay wadarta guud ee maaskarada si loo helo aag caadi ah.
Hawo-mareen kasta waxa lagu dhex daray baarashuud waxaana la qaybiyey dhumuc dhan 5 µm.Qaybaha waxaa lagu daboolay casaan degdeg ah oo dhexdhexaad ah muddo 5 daqiiqo ah waxaana sawirada lagu helay iyadoo la adeegsanayo mikroskoob ee Nikon Eclipse E400, kamarada DS-Fi3 iyo software qabashada curiyaha NIS (nooca 5.20.00).
Dhammaan falanqaynta tirakoobka waxaa lagu sameeyay GraphPad Prism v9 (GraphPad Software, Inc.).Muhiimadda tirakoobka ayaa lagu dejiyay p ≤ 0.05.Caadi ahaan waxaa la tijaabiyay iyada oo la adeegsanayo tijaabada Shapiro-Wilk iyo kala duwanaanshaha midabaynta LacZ ayaa lagu qiimeeyay iyada oo la isticmaalayo t-tijaabo aan lammaane lahayn.
Lixda xildhibaan ee lagu sheegay shaxda 1 waxaa baadhay PCXI, muuqaalkana waxa lagu sifeeyay shaxda 2. Laba xildhibaan oo polystyrene ah (MP1 iyo MP2; 18 µm iyo 0.25 µm, siday u kala horreeyaan) uma muuqan PCXI, laakiin muunadaha soo hadhay ayaa lagu aqoonsan karaa (tusaaleyaal ayaa lagu muujiyay sawirka 5).MP3 iyo MP4 si liidata ayaa loo arki karaa (10-15% Fe3O4; 0.25 µm iyo 0.9 µm, siday u kala horreeyaan).In kasta oo MP5 (98% Fe3O4; 0.25 µm) ay ku jiraan qaar ka mid ah walxaha ugu yar ee la tijaabiyey, waxay ahayd tan ugu dhawaaqa.Alaabta CombiMag MP6 way adag tahay in la kala saaro.Dhammaan kiisaska, awooddayada lagu ogaanayo MF-yada si weyn ayaa loo hagaajiyay annaga oo u dhaqaajinay magnet-ka gadaal iyo hore oo barbar socda xididka.Markii magnets-ku ka fogaadeen xididdada, qaybo ka mid ah waxaa lagu soo saaray silsilado dhaadheer, laakiin markii magnets-ku soo dhawaaday oo xoogga goobta magnetic uu kordhay, silsiladaha qaybtu way soo gaabiyeen markii qaybuhu u haajireen dusha sare ee xididka (fiiri Muuqaalka Dheeraadka ah S1 : MP4), kordhinta cufnaanta walxaha dusha sare.Taa beddelkeeda, marka magnet-ka laga saaro xididdada, xoogga goobta ayaa yaraada oo xildhibaannadu waxay dib u habeeyaan silsilado dhaadheer oo ka soo baxa dusha sare ee xididdada (fiiri Fiidiyowga Dheeraadka ah S2: MP4).Ka dib markii magnetku istaago dhaqdhaqaaqa, qaybuhu waxay sii wadaan inay dhaqaaqaan in muddo ah ka dib markay gaaraan booska dheellitirka.Marka uu MP-gu u dhaqaaqo kana fogaanayo dusha sare ee xiniinyaha, qaybaha magnetic waxay u muuqdaan inay soo jiidaan qashinka dareeraha ah.
Muuqashada MP ee hoos timaada PCXI aad ayay u kala duwan tahay inta u dhaxaysa muunado.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 iyo (d) MP6.Dhammaan sawirada halkan lagu muujiyey waxaa lagu qaaday birlab si toos ah ugu jirta 10 mm korka xididka.Wareegyada waaweyn ee muuqda waa goobooyin hawo ah oo ku xayiran xididada, kuwaas oo si cad u muujinaya astaamaha cidhifka madow iyo caddaanka ee sawirka ka soo horjeeda wajiga.Sanduuqa gaduudan wuxuu muujinayaa weyneynta kor u qaadaysa isbarbardhigga.Ogow in dhexroorka wareegyada magnetka ee dhammaan tirooyinka aysan ahayn in la cabbiro oo ay qiyaastii 100 jeer ka weyn yihiin inta la muujiyey.
Marka magnet-ku u dhaqaaqo bidix iyo midig ee sare ee xididka, xagasha xadhigga MP ayaa isbeddelaya si uu ula jaanqaado magnetka (eeg sawirka 6), sidaas darteed xaddidaya xariiqyada magnetic field.MP3-5, ka dib markii xuduntu gaadho xagasha marinka, qaybuhu waxay ku jiidayaan dusha sare ee xididka.Tani waxay inta badan keentaa in xildhibaanadu ay isku urursadaan kooxo waaweyn oo u dhow halka magnetic field-ku ku xoogan yahay (eeg Fiidiyowga Dheeraadka ah S3: MP5).Tani waxay sidoo kale si gaar ah u caddahay marka la sawirayo meel u dhow dhammaadka xididka, taas oo keenta in MP-gu uu isku geeyo oo uu xoogga saaro is-dhexgalka dareeraha-hawo.Qaybaha MP6, oo ay adkeyd in la kala saaro kuwa ku jira MP3-5, ma aysan jiidi jirin marka magnetku uu ku socdo xididka, laakiin xadhkaha MP ayaa kala go'ay, iyaga oo ka tagay qaybaha muuqaalka (fiiri Fiidiyowga Dheeraadka S4: MP6).Xaaladaha qaarkood, markii goobta birlabaysan ee la dabaqay la dhimay iyadoo magnet-ka loo raray masaafo dheer goobta sawirka, xildhibaan kasta oo soo haray wuxuu si tartiib tartiib ah ugu soo degay dusha hoose ee tuubada cufisjiid, oo ku haray xarigga (fiiri Fiidiyowga Dheeraadka S5: MP3) .
Xagasha xadhigga MP ayaa isbeddela marka magnet-ku u dhaqaaqo dhanka midig ee ka sarreeya xididka.(a) MP3, (b) MP4, (c) MP5 iyo (d) MP6.Sanduuqa gaduudan wuxuu muujinayaa weyneynta kor u qaadaysa isbarbardhigga.Fadlan ogow in fiidiyowyada dheeraadka ah ay yihiin ujeeddooyin macluumaad ah maadaama ay muujinayaan qaab-dhismeedka qayb muhiim ah iyo macluumaad firfircoon oo aan lagu arki karin sawirradan taagan.
Tijaabooyinkeennu waxay muujiyeen in magnet-ka si tartiib tartiib ah gadaal iyo gadaal ugu socota marinka hawo-mareenka ay fududeyso aragtida MF ee macnaha dhaqdhaqaaqa kakan ee vivo.Ma jiro baaritaanno gudaha ah oo la sameeyay sababtoo ah kuullaha polystyrene (MP1 iyo MP2) ayaan ka muuqan xididka.Mid kasta oo ka mid ah afarta MF ee soo hartay waxaa lagu tijaabiyay gudaha vivo iyadoo dhidibka dheer ee magnet uu ku dul taagan yahay trachea xagal qiyaastii ah 30° dhanka toosan (fiiri jaantusyada 2b iyo 3a), taasina waxay keentay silsilado dheer oo MF ah oo aad waxtar u leh. ka badan magnet..qaabeynta waa la joojiyay.MP3, MP4 iyo MP6 lagama helin hawo-mareenka neefta xoolaha nool.Marka la arkayo mareenka neef-mareenka ee jiirka ka dib markii ay si bini'aadannimo u dileen xayawaanka, qaybuhu waxay ahaayeen kuwo aan la arki karin xitaa marka mugga dheeraadka ah lagu daray iyadoo la isticmaalayo bamka saliingaha.MP5 waxa ay lahayd waxa ugu sarreeya ee oksaydhka birta ah oo waxa ay ahayd qaybta kaliya ee muuqata, sidaa awgeed waxa loo isticmaalay in lagu qiimeeyo oo lagu sifo habdhaqanka MP ee vivo.
Meelaynta magnetka ee marinka hawo-mareenka inta lagu jiro gelinta MF waxay keentay in qaar badan, laakiin aan dhammaan, MF-yadu ku urursan yihiin goobta aragtida.Gelitaanka hawo-mareenka ee walxaha ayaa si wanaagsan loogu arkay xayawaanka si bini'aadminimo u nabdoon.Jaantuska 7 iyo Fiidiyowga Dheeraadka ah S6: MP5 wuxuu muujinayaa qabsasho deg-deg ah oo magnet-ku-dhigis ah iyo isku-habaynta qaybaha dusha sare ee hawo-mareenka, taasoo tusinaysa in xildhibaannada lala beegsan karo meelaha la rabo ee hawo-mareenka.Markaad si qoto dheer uga raadinayso hawo-mareenka ka dib dhalmada MF, qaar ka mid ah MF-yada ayaa laga helay meel u dhow carina, taas oo muujinaysa awoodda goobta magnetka oo aan ku filnayn si ay u ururiyaan oo ay u qabtaan dhammaan MF-yada, tan iyo markii lagu soo gudbiyay gobolka ugu badnaan xoogga magnetic inta lagu jiro maamulka dareeraha.habka.Si kastaba ha ahaatee, uruurinta MP ee dhalmada ka dib ayaa sare u kacday agagaarka goobta sawirka, taasoo soo jeedinaysa in xildhibaano badan ay ku hareen gobollada marin-haweedka halkaas oo awoodda birlabeed ee codsatay ay ugu sarreysay.
Sawirada (a) ka hor iyo (b) ka dib marka MP5 la geeyo hawo mareenka hawo mareenka ee jiir dhawaan la naqdiyay oo magnet la dhigay meel ka sarraysa goobta sawirka.Meesha la sawiray waxay ku taalaa inta u dhaxaysa laba siddo oo cartilaginous ah.Waxaa jira xoogaa dareere ah oo ku jira marinnada neef-mareenka ka hor inta aan xildhibaanka la dhalin.Sanduuqa gaduudan wuxuu muujinayaa weyneynta kor u qaadaysa isbarbardhigga.Sawiradan waxaa laga soo qaatay fiidyaha lagu soo bandhigay S6: MP5 Video Dheeraadka ah.
Dhaqdhaqaaqa birlabeedka ee marinka hawo-mareenka ee vivo waxay keentay isbeddel ku yimi xagasha silsiladda MP ee dusha hawada, oo la mid ah tan lagu arkay xididada (eeg sawirka 8 iyo Fiidiyowga Dheeraadka ah S7: MP5).Si kastaba ha ahaatee, daraasaddeena, xildhibaanada laguma jiidi karo dusha sare ee mareenada neef-mareenka, sida xididada xididada ay sameyn karaan.Xaaladaha qaarkood, silsiladda MP ayaa dheeraysa marka magnetku u dhaqaaqo bidix iyo midig.Waxa xiisaha lihi leh, waxa aanu sidoo kale ogaanay in silsilada qaybtu ay beddesho qoto dheer ee lakabka dusha sare ee dareeraha marka magnet-ka loo dhaqaajiyo si dheer oo ay weheliso hawo-mareenka, oo uu balaadho marka magnetka si toos ah kor loogu qaado oo silsiladda qaybtu u wareegto meel toosan (eeg. Fiidiyowga dheeriga ah S7).: MP5 at 0:09, midigta hoose).Habka dhaqdhaqaaqa dabeecadda ayaa isbeddelay markii magnet-ka loo dhaqaajiyay dhinaca sare ee hawo-mareenka (ie, bidix ama midig ee xayawaanka, halkii uu ku socon lahaa dhererka dhuunta neefta).Qaybaha ayaa weli si cad u muuqday intii ay dhaqdhaqaaqayeen, laakiin markii magnet-ka laga saaray hawo-mareenka, talooyinka xadhkaha qaybtu waxay noqdeen kuwo muuqda (fiiri Video S8: MP5, laga bilaabo 0:08).Tani waxay ku raacsan tahay habdhaqanka la arkay ee goobta magnetic ee hoos yimaada ficilka goob magnet ah oo lagu dabaqay daboolka muraayadda.
Sawirro tusaale ah oo muujinaya MP5 oo ku jira hawo-mareenka hawada ee jiirka la suuxiyay.(a) Magnet waxaa loo isticmaalaa in lagu helo sawirada korka iyo bidix ee hawo mareenka, ka dib (b) ka dib marka magnetka loo wareejiyo midig.Sanduuqa gaduudan wuxuu muujinayaa weyneynta kor u qaadaysa isbarbardhigga.Sawiradan waxay ka soo jeedaan fiidyaha lagu soo bandhigay Fiidiyowga Dheeraadka ah ee S7: MP5.
Marka labada tiir lagu hagaajiyay jihada waqooyi-koonfur ee korka iyo ka hooseysa ee hawo-mareenka (ie, soo jiidashada; Jaantuska. 3b), xargaha MP waxay u muuqdeen kuwo dheer waxayna ku yaalliin gidaarka dambe ee hawo-mareenka halkii ay ka ahaan lahaayeen dusha dambe ee dhuunta. trachea (eeg Lifaaqa).Muuqalka S9:MP5).Si kastaba ha ahaatee, xaddi sare oo qaybo ka mid ah hal goob (ie, dusha dhabarka ee hawo-mareenka) lama ogaan ka dib markii la maamulay dareeraha iyadoo la isticmaalayo qalab magnet ah oo laba geesood ah, kaas oo badanaa ku dhaca hal qalab oo magnet ah.Kadib, markii hal magnet loo habeeyey inuu iska celiyo tiirarka iska soo horjeeda (Jaantuska 3c), tirada qaybaha ka muuqda goobta aragtida ma kordhin ka dib dhalmada.Dejinta labada isku xidhka magnetka ayaa ah mid adag sababtoo ah xoogga goobta magnetka ee sarreeya kaas oo soo jiidanaya ama u riixaya magnets siday u kala horreeyaan.Habaynta ayaa markaa loo beddelay hal magnet oo barbar socota hawo-mareenada laakiin iyada oo la marayo marin-haweedka xagal 90 darajo ah si ay xadhkaha xoogga u dhaafaan gidaarka tracheal si toos ah (Jaantus 3d), jihada loogu talagalay in lagu go'aamiyo suurtagalnimada isku-darka walxaha gidaarka dambe.la dhawro.Si kastaba ha ahaatee, qaabkan, ma jirin dhaqdhaqaaq ururin MF ah oo la aqoonsan karo ama dhaqdhaqaaqa magnetka.Iyada oo ku saleysan dhammaan natiijooyinkaan, qaabeynta leh hal magnet iyo jihada 30-degree ayaa loo doortay daraasadaha vivo ee sidayaal hidde-sideyaasha (Jaantus. 3a).
Markii xayawaanka la sawiray dhowr jeer isla markiiba ka dib markii si bini'aadannimo ah loo huray, maqnaanshaha dhaqdhaqaaqa unugyada faragelinta waxay la macno tahay in khadadka qaybaha gaagaaban ee gaagaaban laga ogaan karo goobta cad ee cartilaginous, 'lura'' iyadoo la raacayo dhaqdhaqaaqa tarjumaada ee magnetka.si cad u arag joogitaanka iyo dhaqdhaqaaqa qaybaha MP6.
Titer-ka LV-LacZ wuxuu ahaa 1.8 x 108 IU/mL, iyo ka dib markii 1:1 lagu daray CombiMag MP (MP6), xayawaanka waxaa lagu duray 50 µl oo ah qiyaasta tracheal ee 9 x 107 IU/ml ee gaariga LV (ie 4.5). x 106 TU/jiir).)).Daraasadahan, halkii laga dhaqaajin lahaa magnetka inta lagu jiro foosha, waxaan hagaajinnay magnetka hal boos si aan u go'aamino haddii gudbinta LV-ga (a) la wanaajin karo marka la barbardhigo bixinta vector ee maqnaanshaha goob magnet ah, iyo (b) haddii marin-haweedka uu kari karo diirada saaraUnugyada lagu beddelayo meelaha magnetic bartilmaameedka ee mareenka sare ee neef-mareenka.
Joogitaanka birlabadaha iyo isticmaalka CombiMag oo lagu daray xididada LV uma muuqan inay si xun u saameeyaan caafimaadka xoolaha, si la mid ah habkayaga caadiga ah ee habka gaarsiinta LV.Sawirada hore ee tracheal-ka ee lagu sameeyay khalkhalka farsamada (Jaantuska Dheeraadka ah 1) ayaa muujiyay in kooxda LV-MP ee la daweeyay ay si aad ah u sarreeyaan heerarka gudbinta ee joogitaanka magnet (Jaantus. 9a).Kaliya qadar yar oo midab buluug ah oo LacZ ah ayaa ku jiray kooxda xakamaynta (Jaantuska 9b).Tirakoobka gobollada caadiga ah ee wasakhaysan ee X-Gal waxay muujisay in maamulka LV-MP ee joogitaanka goob birlabeedka ay keentay in ku dhawaad ​​6-laab horumar ah (Jaantus. 9c).
Tusaalaha sawirada isku dhafan ee muujinaya gudbinta tracheal ee LV-MP (a) joogitaanka goob birlab ah iyo (b) maqnaanshaha magnet.(c) Horumarka la taaban karo ee aagga caadiga ah ee wareejinta LacZ ee hawo mareenka iyadoo la adeegsanayo magnet (* p = 0.029, t-test, n = 3 koox kasta, macnaheedu waa ± qaladka caadiga ah ee celceliska).
Qaybaha wasakhaysan cas ee degdega ah ee dhexdhexaadka ah (tusaale lagu muujiyay sawirka Dheeraadka ah 2) ayaa tilmaamay in unugyada LacZ-ku ay joogaan isla muunad iyo isla goob sidii hore loo sheegay.
Caqabadda ugu muhiimsan ee daaweynta hidda-socodka hawo-mareenka ayaa weli ah meelaynta saxda ah ee qaybaha sidaha meelaha xiisaha leh iyo gaaritaanka heer sare oo wax ku ool ah oo wax ku ool ah ee sambabada wareegta iyada oo ay jirto socodka hawada iyo nadiifinta xabka ee firfircoon.Sideyaasha LV ee loogu talagalay daawaynta cudurada neef-mareenka ee cystic fibrosis, kordhinta wakhtiga deggenaanshaha walxaha sidaha marinnada hawo mareenka ayaa ilaa hadda ah hadaf aan la gaadhi karin.Sida ku cad Castellani et al., Isticmaalka beeraha magnetic si kor loogu qaado gudbinta ayaa faa'iido u leh hababka kale ee gudbinta hiddaha sida electroporation sababtoo ah waxay isku dari kartaa fududaynta, dhaqaalaha, gaarsiinta gudaha, waxtarka korodhka, iyo wakhtiga gaaban ee soo-saarka.iyo suurtogal ahaan in yar oo baabuur ah10.Si kastaba ha ahaatee, in vivo dhigaalka iyo habdhaqanka qaybaha magnetic ee marinnada hawo-mareenka ee hoos yimaada saamaynta xoogagga magnetic dibadda waligood lama sharaxin, iyo dhab ahaantii awoodda habkan si loo kordhiyo heerarka muujinta hidda-socodka ee hawo-mareenada nool lama soo bandhigin vivo.
Tijaabooyinkeena in vitro-ga ee PCXI synchrotron waxay tuseen in dhammaan qaybaha aanu tijaabinay, marka laga reebo polystyrene MP, ay ka muuqdaan qaabaynta sawirka ee aan isticmaalnay.Marka ay jirto goob birlabeed ah, dhulalka magnetic waxay sameeyaan xargo, dhererkoodu wuxuu la xiriiraa nooca qaybaha iyo xoogga goobta magnetic (ie, u dhawaanshaha iyo dhaqdhaqaaqa magnetka).Sida ku cad Jaantuska 10, xadhkaha aan aragno waxa la sameeyay iyada oo qayb kasta oo gaar ahi ay noqoto magnetized oo ay soo jiidato goobkeeda birlabeedka.Goobahaas kala duwani waxay sababaan in qaybo kale oo la mid ah ay ururiyaan oo ay ku xidhaan dhaqdhaqaaqyada xargaha kooxeed sababtoo ah ciidamada maxalliga ah ee ka imanaya xoogagga deegaanka ee soo jiidashada iyo iska caabinta walxaha kale.
Jaantuska muujinaya (a, b) silsilado qaybo ka samaysan gudaha xididada dareeraha ka buuxo iyo (c, d) hawo-mareenka hawada ka buuxo.Ogsoonow in xididada xididada iyo hawo mareenka aan loo sawirin miisaan.Guddiga (a) waxa kale oo ka kooban sharaxaad MF ah oo ay ku jiraan qaybo Fe3O4 ah oo lagu habeeyay silsilado.
Markii magnetku kor u dhaafo xididka, xagasha xadhkaha qaybtu waxay gaadhay heerkii ugu muhiimsanaa ee MP3-5 oo ka kooban Fe3O4, ka dib xadhiggii qaybtu kuma sii nagaanin booskiisii ​​asalka ahaa, laakiin wuxuu u dhaqaaqay dusha sare oo meel cusub.magnet.Saamayntani waxay u badan tahay inay dhacdo sababtoo ah dusha sare ee koofiyada muraayadda ayaa siman oo ku filan si loogu oggolaado dhaqdhaqaaqan inuu dhaco.Waxa xiisaha lihi leh, MP6 (CombiMag) uma dhaqmin habkan, laga yaabee sababta oo ah qaybuhu way ka yaraayeen, dahaar ka duwan ama dusha sare ayaa lahaan jiray, ama dareeraha xambaara lahaanshaha ayaa saameeyay awoodooda dhaqdhaqaaq.Kala duwanaanshaha sawirka qaybta CombiMag ayaa sidoo kale daciif ah, oo soo jeedinaya in dareeraha iyo qaybaha ay yeelan karaan cufnaan isku mid ah oo sidaas darteed si fudud uma socon karaan midba midka kale.Qaybaha ayaa sidoo kale ku dhegi kara haddii magnet-ku si degdeg ah u socdo, taas oo muujinaysa in xoogga birlabku uusan mar walba ka adkaan karin khilaafka u dhexeeya qaybaha dareeraha, taas oo soo jeedinaysa in xoogga magnetka iyo masaafada u dhaxaysa magnetka iyo aagga la beegsanayo aysan u iman sidii yaab.muhiim ah.Natiijooyinkani waxay sidoo kale tilmaamayaan in inkasta oo magnets ay qaban karaan microparticles badan oo ku qulqulaya aagga bartilmaameedka, uma badna in magnets lagu tiirsado si ay u dhaqaajiyaan qaybaha CombiMag ee dusha sare ee hawo-mareenka.Sidaa darteed, waxaan ku soo gabagabeynay in vivo LV daraasaadka MF ay tahay in ay isticmaalaan goobaha magnetic static si ay jir ahaan u beegsadaan meelaha gaarka ah ee geedka hawo-mareenka.
Marka qaybaha jidhka la soo geliyo, way adag tahay in lagu garto macnaha guud ee unug dhaqaaqa jidhka ee kakan, laakiin awoodooda wax lagu ogaanayo ayaa la hagaajiyay iyadoo magnet-ku si siman u dulmaro hawo-mareenka si ay "u milicsato" xadhkaha MP.Iyadoo sawir-qaadista waqtiga-dhabta ah ay suurtogal tahay, way sahlan tahay in la ogaado dhaqdhaqaaqa walxaha ka dib marka xayawaanka si bini'aadannimo ah loo dilay.Xoojinta MP ayaa inta badan meeshan ugu sareysay marka magnet la dul dhigo aagga sawirka, inkastoo qaybo ka mid ah sida caadiga ah laga helay meel ka sii hooseeysa hawo-mareenka.Si ka duwan daraasaadka vitro-ga, qaybo ka mid ah laguma jiidi karo hawo-mareenka dhaqdhaqaaqa magnetka.Natiijooyinkani waxay la jaan qaadayaan sida xababka ku daboolan hawo-mareenka sida caadiga ah u habeeyaan walxaha neefta, ku xira xabka ka dibna ka nadiifiya habka nadiifinta xuubka-ciliary.
Waxaan ku qiyaasnay ​​in isticmaalka magnets ee ka sarreeya iyo ka hooseeya hawo-mareenka si loo soo jiito (Jaantus. 3b) waxay keeni kartaa goob birlab ah oo isku mid ah, halkii ay ka ahaan lahayd goob birlab ah oo aad u urursan hal mar, taasoo keeni karta qaybinta qaybo isku mid ah..Si kastaba ha ahaatee, daraasadayada hordhaca ah ma helin caddayn cad oo taageeraya mala-awaalkan.Si la mid ah, dejinta lammaane birlab ah si ay u celiso (Jaantus. 3c) ma keenin in qaybo badan ay degaan sawirka.Labadan natiijooyin waxay muujinayaan in isku-xidhka laba-magnet-ku aanu si weyn u wanaajin kontoroolka maxalliga ah ee tilmaamaya MP, iyo in xoogagga birlabeedka xooggan ee ka dhashay ay adag tahay in la habeeyo, taasoo ka dhigaysa habkan mid aan waxtar lahayn.Sidoo kale, jihaynta magnet-ka sare iyo guud ahaan hawo-mareenka (Jaantuska 3d) sidoo kale ma kordhin tirada qaybaha ka hadhay aagga la sawiray.Qaar ka mid ah qaababkan beddelka ah ayaa laga yaabaa inaanay guulaysan sababtoo ah waxay keenaan hoos u dhac ku yimaada xoogga goobta birlabeedka ee aagga dhigaalka.Sidaa darteed, qaabeynta magnetka kaliya ee 30 darajo (Jaantus. 3a) waxaa loo tixgeliyaa habka ugu fudud uguna waxtarka badan ee habka baaritaanka vivo.
Daraasada LV-MP waxay muujisay in marka LV vectors lagu daro CombiMag oo la keeno ka dib markii jir ahaan loo dhibay joogitaanka goobta magnetic, heerarka gudbinta ayaa si weyn u kordhay hawo-mareenka marka la barbardhigo kantaroolka.Iyada oo ku saleysan daraasadaha sawir-qaadista synchrotron iyo natiijooyinka LacZ, goobta magnetic waxay u muuqatay inay awood u leedahay inay LV ku hayso hawo-mareenka oo ay yarayso tirada qaybaha vector ee isla markiiba si qoto dheer u galay sambabada.Horumarinta bartilmaameedka noocan oo kale ah waxay u horseedi kartaa hufnaan sare iyada oo la dhimayo titers bixinta, beddelka aan la beegsanayn, waxyeellooyinka bararka iyo difaaca jirka, iyo kharashka wareejinta hidda-wadaha.Muhiimad ahaan, sida uu qabo soo saaraha, CombiMag waxaa loo isticmaali karaa iyadoo lagu darayo hababka kale ee wareejinta hidda-wadaha, oo ay ku jiraan fayraska kale ee fayraska (sida AAV) iyo asiidhyada nucleic.